病毒的形态结构检查法

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病毒的形态结构检查法

（一）电镜技术 绝大多数病毒的大小超过了光学显微镜的辨别能力，

构，其缺点是敏感性低。 为了提高电镜技术的敏感性与特异性，在负染的基础上，又进展了免疫电镜技术。它基于抗原抗体结合形成免疫复合物的原理，用特异性抗体与样品结合，观看凝集的病毒颗粒，可

通常惟独在电镜下放大几万至几十万倍才干观看病毒的形态。 1．标本

使其敏感性提高10～100倍，同时病毒也较易识别。此外，还有胶体

制备用电镜观看病毒颗粒必需使标本中含有大量的病毒才干举行，因此，

金标志技术。 2．病毒的识别负染技术将病毒分为两种形态，即暴露

浓缩标本是须要的。可以用超速离心或超过滤法挺直浓缩标本中的病毒，

病毒和有包膜病毒，属于前者的有腺病毒、乳多空病毒等，属于后者

也可以将标本接种于培养细胞使病毒增殖后再检查。此外，假如病毒是

的有疱疹病毒、布尼亚病毒等。大小也是鉴定病毒的标准之一，如小

已知的，且有特异的抗血清，可用免疫凝集的办法浓缩病毒。常用的病

RNA病毒为20～40 nm，痘病毒达200～300 nm。电镜下病毒的形态有

毒标本制备办法有两种。①超薄切片法：也称正染法，标本用固定，经

圆形、杆形、子弹形等规章形和不规章的多边形，如肠道病毒、登革

过脱水、包埋、切片、染色后，观看病毒颗粒，本法操作复杂，但标本

病毒为圆形，狂犬病病毒为子弹形，呼肠孤病毒为六角形，疱疹病毒

可长久保存。②负染法：挺直将病毒悬液（也可用细胞）滴在铜网上，

为圆形或多边形。有的病毒表面有刺突，如麻疹病毒、水疱性口炎病

用重金属盐（通常用）举行染色，观看病毒颗粒,10～20 min可出结果，

毒，而另一些病毒表面是光洁的，如单纯疱疹病毒、巨细胞病毒。RNA

负染技术基于负性染料不渗入病毒颗粒，而是将病毒颗粒包绕，因为负

病毒通常在细胞浆成熟，DNA病毒在细胞核成熟（痘病毒例外）。核

性染料含重金属，不穿透电子束，使病毒颗粒具有亮度，在周围暗背景

衣壳的对称性也是鉴定病毒特征的重要标准，DNA病毒普通为立体对

上显示亮区，这种办法较正染法显示的图像清楚，可显示病毒的表面结



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称，RNA病毒普通为螺旋对称。总之，在举行病毒的形态学识别时，应充分注重其特别性与复杂性。无数病毒，如轮状病毒、星状病毒、嵌杯状病毒、甲型肝炎病毒等，都是用电镜首先发觉的。 （二）光学显微镜 光学显微镜通常很难挺直看到病毒颗粒，当细胞感染某些病毒以后，在细胞浆和／或细胞核内可浮现包容体（inclusion body)，通过HE染色后，在光学显微镜下可以看到包容体。不同病毒的包容体往往具有独特的形态、染色特性和存在部位，例如单个还是多个、圆形还是不规章形、外围有无晕圈、嗜酸性还是嗜碱性、在核内还是在胞浆内等。通过包容体的特征往往可以判断出是哪类病毒感染。例如疱疹病毒形成核内嗜酸性包容体，痘病毒则形成胞浆内嗜酸性包容体，麻疹病毒同时形成核内和胞浆内嗜酸性包容体，狂犬病病毒在患病动物的神经细胞的胞浆内形成嗜酸性内基小体等。 二、病毒大小的测定 测量病毒体大小的办法较多，如电子显微镜挺直测量法、过滤法、超速离心沉淀法等，最常用法的是电子显微镜挺直测量法。 1．电子显微镜挺直测量法电子显

微镜可挺直观看到病毒的大小，将标本悬液置于载网膜上，举行负染色观看，对比电镜视野标尺，可以挺直算出病毒体的实际大小。 2．过滤法将病毒液通过不同孔径大小的滤膜，按照通过与滞留病毒的孔径与滤过病毒的感染滴度可间接测定出病毒的大小。其办法如下。 (1)将病毒液（应含有少量的蛋白质，以防止病毒颗粒被滤膜或滤板吸附，普通用含2％血清或0.5％明胶或0.5％清蛋白的MEM,)10000 r/min离心20～30 min，吸取上清液举行测定。 (2)取上清液分离通过不同孔径的滤器。 (3)将未过滤的病毒液以及通过各级孔径的滤液分离用敏感细胞或试验动物测定感染力，并计算出LD50或TCID。 (4)按照通过与滞留病毒的孔径与滤过病毒的感染滴度计算出病毒的大小。【关键词】戊二醛 磷钨酸 网 上一篇： 下一篇：

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