聚丙烯酰氨凝胶电泳配方与步骤(精华)

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聚丙烯酰氨凝胶电泳配方与步骤（精华）



储备液：

1、丙烯酰胺浓缩液（30%T、2.7%C）:将29.2 g丙烯酰胺与0.8 g双丙烯酰胺溶解于70 ml去离子水中。当丙烯酰胺完全溶解后，定容至100 ml。采用0.5微米滤膜将溶液进行真空抽滤。4℃保存于棕色瓶中。保存时间不能超过1个月。

2、1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，浓缩的分离胶缓冲液：将18.2 g Tris-base溶解于约80 ml水中，HCl调节pH至8.8，加水定容至100 ml。4℃保存。

3、0.5 mol/L Tris-HCl，pH 6.8，浓缩的积层胶缓冲液：将6.1 g Tris-base溶解于约80 ml水中，HCl调节pH至6.8，加水定容至100 ml。4℃保存。 4、10%（m/V）SDS：将10 g SDS溶解于100 ml水中。

5、样品储备缓冲液[0.06 mol/L Tris-HCl，pH 6.8，2% SDS，10%甘油，0.025%溴酚蓝]:

水 4.8 ml 0.5 mol/L Tris-HCl，pH 6.8 1.2 ml 10% SDS 2.0 ml 甘油 1.0 ml 溴酚蓝痕量

室温下保存。SDS-还原缓冲液通过在使用样品储备液前，每0.95 ml储备液中加入50微升2-巯基乙醇而制备。

催化剂

1、10%过硫酸铵，现配现用。

2、TEMED: 使用瓶中未经稀释的TEMED。阴凉干燥避光保存。

电泳缓冲液

每100 ml中加入0.3 g Tris碱，1.4 g甘氨酸，1ml 10% SDS。

凝胶制备

分离胶配方

组分 7.5% T 12% T 水 4.85mL 3.35mL 分离胶储备液 2.5mL 2.5mL 10%SDS 0.1mL 0.1mL 丙烯酰胺/双丙烯酰胺（30%T） 2.5 mL 4.0mL 10% APS 50μL 50μL TEMED 5μL 5μL

积层胶（10 mL）： 水6.1 ml

0.5 mol/L Tris-HCl，pH 6.8 2.5 ml 10% SDS 0.1 ml


丙烯酰胺储备液 1.3 ml

电泳：

常规电泳采用恒流模式：16-24 mA/mm凝胶厚度 迷你电泳设备采用恒压模式：20-30 V/cm凝胶长度 通常电泳持续到溴酚蓝到达凝胶底部。

染色与脱色：

1、染色液: 将0.1%考马斯亮蓝R-250（m/V）溶解于40%甲醇（v/v）、10%乙酸中（v/v）。溶解后过滤。染色液可以重复使用，室温保存。 2、使用过量的染色液浸泡凝胶，时间为30分钟。 3、使用大量过量的40%甲醇，10%乙酸进行脱色。 4、染色前，将胶放置在40%甲醇（v/v）、10%三氯乙酸中（m/v）中孵育1小时，可以防止小分子量蛋白在脱色过程中的损失。

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